光阻法VS顯微計(jì)數(shù)法——脂質(zhì)體注射液不溶性微粒檢測(cè)不同方法測(cè)試對(duì)比

研究背景：

注射液的不溶性微粒檢測(cè)項(xiàng)是中國(guó)藥典中的必需檢測(cè)項(xiàng)，在2020版《中國(guó)藥典0903 不溶性微粒檢查》章節(jié)中推薦了兩種檢測(cè)方法，包括光阻法和顯微計(jì)數(shù)法。法規(guī)中對(duì)于不同類(lèi)型的樣品應(yīng)該采用哪種方法進(jìn)行檢測(cè)給出了一個(gè)簡(jiǎn)短說(shuō)明，該文件中指出：光阻法不適用于黏度過(guò)高和易析出結(jié)晶的制劑，也不適用于進(jìn)入傳感器時(shí)易產(chǎn)生氣泡的注射劑。

然而隨著各種新型制劑的出現(xiàn)，僅依據(jù)上述對(duì)于樣品性狀的描述，很難判斷應(yīng)該采用哪種方法進(jìn)行樣品的不溶性微粒檢測(cè)。其中脂質(zhì)體類(lèi)注射劑在近些年內(nèi)發(fā)展的尤為迅速，因?yàn)樗鼈兊男螒B(tài)與細(xì)胞類(lèi)似，并且可以通過(guò)一定的設(shè)計(jì)結(jié)合各種物質(zhì)，成為藥物遞送技術(shù)的理想載體。本文將對(duì)一些脂質(zhì)體注射液采用不同的方法進(jìn)行不溶性微粒檢測(cè)，通過(guò)不同檢測(cè)方法的結(jié)果對(duì)比，以找出脂質(zhì)體類(lèi)注射液不溶微粒檢測(cè)的最佳方案。

測(cè)試案例：

案例一：某公司脂質(zhì)體注射液（樣品裝量信息：0.5毫升/瓶*4批）

光阻法測(cè)試方案：樣品原液0.5毫升稀釋10倍之后進(jìn)行測(cè)試，每次測(cè)試取樣1毫升，連續(xù)測(cè)四次，舍棄第一次測(cè)試結(jié)果，最終統(tǒng)計(jì)每容器中尺寸≥10 μm的顆粒數(shù)以及≥25 μm的顆粒數(shù)；

顯微計(jì)數(shù)法測(cè)試方案：樣品原液進(jìn)行測(cè)試，統(tǒng)計(jì)每容器中尺寸≥10 μm的顆粒數(shù)以及≥25 μm的顆粒數(shù)；

圖1：（a）不同批次樣品光阻法測(cè)試每次取樣的測(cè)試結(jié)果；（b）最終統(tǒng)計(jì)的每容器中的不同尺寸范圍的微粒數(shù)量；

圖2：顯微計(jì)數(shù)法測(cè)試結(jié)果，每容器中不同尺寸范圍的微粒數(shù)量；

在兩項(xiàng)檢查中可以看到樣品中的不溶性微粒數(shù)量都在藥典要求范圍之內(nèi)，但是該樣品進(jìn)行光阻法測(cè)試前對(duì)樣品進(jìn)行了稀釋操作，可能會(huì)引發(fā)樣品內(nèi)的顆粒數(shù)量發(fā)生變化。

案例二：某公司的脂質(zhì)納米粒（樣品裝量信息：1.5 mL*1批）

光阻法測(cè)試方案：樣品原液測(cè)試，單次進(jìn)樣量為0.1 mL，連續(xù)測(cè)四次，舍棄第一次結(jié)果，最終統(tǒng)計(jì)每毫升中尺寸≥10 μm的顆粒數(shù)以及≥25 μm的顆粒數(shù)；

顯微計(jì)數(shù)法測(cè)試方案：樣品原液進(jìn)行測(cè)試，統(tǒng)計(jì)每毫升中尺寸≥10 μm的顆粒數(shù)以及≥25 μm的顆粒數(shù)；

圖3：采用光阻法和顯微計(jì)數(shù)法對(duì)樣品進(jìn)行不溶性微粒檢測(cè)的不同尺寸范圍的顆粒數(shù)量統(tǒng)計(jì)

該樣品采用兩種方法進(jìn)行測(cè)試的結(jié)果測(cè)試對(duì)比差距較大，光阻法測(cè)試結(jié)果中不同尺寸范圍的顆粒比較少，這歸因于測(cè)試過(guò)程中的進(jìn)樣量比較少，可能無(wú)法完整覆蓋光阻法設(shè)備的光學(xué)檢測(cè)窗口；另外通過(guò)顯微計(jì)數(shù)法測(cè)試結(jié)果的原始圖片數(shù)據(jù)可以看出，樣品中較大尺寸顆粒主要包括纖維、藥物聚集及膠塞等，這些顆粒的存在可能是造成樣品中不溶性微粒增多的原因之一。

數(shù)據(jù)分析與討論：

從上面的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果分析來(lái)講，脂質(zhì)體類(lèi)樣品更適合用顯微計(jì)數(shù)法來(lái)進(jìn)行樣品的不溶性微粒檢測(cè)，其原因如下：

1、脂質(zhì)體類(lèi)樣品裝量較小，通常為幾毫升，甚至不到一毫升，樣品的稀釋可能會(huì)對(duì)樣品體系里的顆粒數(shù)量產(chǎn)生影響，另外少量的樣品不一定能覆蓋光阻法設(shè)備的檢測(cè)窗口，從而會(huì)產(chǎn)生測(cè)試誤差；

2、脂質(zhì)體類(lèi)樣品具有一定的濁度，采用光阻法進(jìn)行測(cè)試時(shí)，會(huì)形成測(cè)量誤差，可以看到單個(gè)樣品每次測(cè)試數(shù)據(jù)不穩(wěn)定，這主要是歸因于光阻法原理設(shè)備測(cè)試渾濁樣品粒度存在固有缺陷；

3、脂質(zhì)體類(lèi)樣品中的顆粒大小會(huì)隨物理環(huán)境的變化形成聚集態(tài)，圖像法粒度儀可以直接觀察到這些顆粒，亦可以觀察到外來(lái)顆粒，有利于顆粒的溯源分析；

總結(jié)：

回歸到藥典法規(guī)文件的要求，文件中指出：當(dāng)光阻法的測(cè)定結(jié)果不符合規(guī)定或者供試品不適用于用光阻法進(jìn)行測(cè)定時(shí)，應(yīng)采用顯微計(jì)數(shù)法進(jìn)行檢測(cè)，并且以顯微計(jì)數(shù)法的測(cè)定結(jié)果為判定依據(jù)。經(jīng)過(guò)對(duì)脂質(zhì)體案例測(cè)試結(jié)果的分析可以看出，脂質(zhì)體類(lèi)注射劑的不溶性微粒檢查項(xiàng)應(yīng)優(yōu)先推薦顯微計(jì)數(shù)法。

相關(guān)設(shè)備介紹：

YH-LEIP-0201 光阻法不溶性微粒分析儀

√滿足《中國(guó)藥典》要求；

√可直接檢測(cè)注射液、無(wú)菌液、輸液器具及包材等不溶性微粒的數(shù)量及大小；

√可檢測(cè)有色樣品。

YH-MIP-0205 Pro顯微計(jì)數(shù)法不溶性微粒分析儀

√ 全濾膜自動(dòng)掃描，操作簡(jiǎn)單，節(jié)約時(shí)間；

√ 全自動(dòng)顆粒計(jì)數(shù)，保護(hù)眼睛，減少人為操作誤差；

√ 符合各國(guó)藥典/ 國(guó)標(biāo)法規(guī)，一鍵自動(dòng)出具對(duì)應(yīng)報(bào)告；

√ 符合 21CFR Part11 及 GMP 對(duì)數(shù)據(jù)完整性的要求。

胤煌科技(YinHuang Technology)是一家專(zhuān)注于為醫(yī)藥、半導(dǎo)體及化工材料等行業(yè)提供檢測(cè)分析設(shè)備及技術(shù)服務(wù)的高科技公司，致力于為客戶提供全面、準(zhǔn)確的檢測(cè)分析和解決方案。主營(yíng)產(chǎn)品包括不溶性微粒分析儀，可見(jiàn)異物檢查分析儀，原液粒度及Zeta電位分析儀，CHDF高精度納米粒度儀，高分辨納米粒度儀，溶液顏色測(cè)定儀，澄清度測(cè)定儀等，公司自主研發(fā)的YH-MIP系列顯微計(jì)數(shù)法不溶性微粒儀、YH-FIPS系列流式動(dòng)態(tài)圖像法粒度儀，YH-FIPS系列微流成像顆粒分析儀已經(jīng)在生物醫(yī)藥、半導(dǎo)體及材料化工領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。